保留时间变来变去怎么办？

高效液相色谱仪
- 保留时间-异常问题 -

解决方案

液相色谱分析的关键因素之一便是保留时间的重现性，今天我们就来简单的聊聊它的一些小问题。

Part 01  首先我们来看几个定义

A 保留时间(Rt)：

被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间。

B 死时间(t)：

不与固定相作用的组分的保留时间，即分配系数为0的组分的保留时间称为死时间。

C 折合保留时间（Rt'）：

扣除死时间后的保留时间，某组分由于溶解（或者吸附）于固定相，比不溶解（或者不吸附）的组分在柱中多停留的时间又称为调整保留时间。

在实验室条件下（温度、色谱柱等）一定时，折合保留时间仅决定于组分的性质，因此折合保留时间是定性的基本参数。

Part 02 异常问题，需排查的几个方面：

若保留时间总是改变，那么这是属于异常问题，可以从多个方面去排查原因。

保留时间的改变一般是分为两种不同的情况：

即保留时间总是沿单方向发生变化（时间或延长或缩短）和保留时间无规律的左右波动。将此两种情况区分开来对待可以更好地理清解决问题的思路。例如：色谱柱性能下降的时候，很少会导致保留时间无规律的左右波动，而是引起保留时间沿单方向发生变化。

A 排除实验室误差：

实验室环境条件是否合适稳定（室温变化小于2度），玻璃器皿是否干净无污染，是否存在人为失误，偶然误差等。

B 流动相排查：

关注流动相的有效期，流动相组分是否有可能挥发变化（封口膜），流动相平衡时间是否充足（梯度洗脱未回到初始流动相浓度或时间不够），流动相PH值是否合适（缓冲能力、样品影响），管路是否被污染，管路有没有气泡，管路是否有漏液（密封垫漏液、排液阀没拧紧等），比例阀工作是否正常（注意纯有机试剂与高盐流动相混合的方法）。

C 色谱柱的问题（色谱柱性能下降或者被污染）：

性能下降：色谱柱上键合的配体有机长链的稳定性是有一定寿命的，即使在合适的PH范围内（常见的硅胶基质的色谱柱在pH4左右时比较合适）。长期使用后，固定相也会慢慢水解；即使经常冲洗色谱柱亦会累计色谱柱的水解。

色谱柱被污染：色谱柱是具有吸附性的，流动相带过来的任何污染会累积到色谱柱上面，如流动相瓶/流动相，仪器密封垫碎屑，以及样品等等。特别要注意的是水，是很容易被污染的流动相，少量污染物可能最终慢慢富集到色谱柱上，从而引起问题，样品有时候也是污染的一大来源，特别是基质复杂的样品，例如血样，蛋白样等。

减少污染的方法，最好是把问题处理在前面，它比污染后的清洗更快捷有效，过滤流动相和样品以及使用预保护柱是比较不错的选择。

因此，在进行生物样品、农产样品、水产样品、天然药物等复杂基质的样品分析时, 为防止大量基质进入色谱柱造成污染和损伤,使用保护柱是可行的方法之一，岛津提供的保护柱工具包都包含相应的柱芯和一个柱套连接器，并可以提供复杂基质样品保护柱再生系统升级方案，以满足长期使用的需求，优化实验室效率。

D 液相的泵也有可能存在问题：

输液是否正常，流量是否准确，压力是否稳定。

这些都是日常作为仪器性能判断的标准，定期的做仪器性能测试以及仪器的维护保养是预防问题发生的好帮手。

分析仪器是由精密零部件组成的精密机械，长时间运转带来的磨损、腐蚀会造成仪器功能不全和性能下降。这些问题可能正在实验室里发生，也对工作效率和仪器寿命产生影响。因此采取积极的应对措施至关重要！

维护保养服务为仪器进行专门的清洁、校正、润滑和测试，同时更换易损耗部品。通过严谨科学的程序使仪器达到最佳状态，帮助用户获得准确稳定的分析结果，最大限度的减少计划外停机，提升工作效率。