检测方法 | 脂肪与脂肪油-反式脂肪酸评价方案

检测方法 | 脂肪与脂肪油-反式脂肪酸评价方案

  反式脂肪酸(trans fatty acid, TFAs)指含有一个或多个反式双键结构的一类不饱和脂肪酸,对于人体存在诸多危害:比如增加人体血液的黏稠度和凝聚力,容易导致血栓的形成;反式脂肪酸不容易被人体消化,容易在腹部积累,导致肥胖。

  用作特殊人群的药物和药用辅料中的TFAs确实同样需要严格的控制。药用级控制更加严格,我们按照《0713 脂肪与脂肪油测定法》中“反式脂肪酸”项目标准做了药用级大豆油样品1和样品2的对比。

分析仪器及色谱柱选型方案

气相色谱仪

Nexis GC-2030气相色谱仪

◆ 全新智能交互界面为分析人员贴心设计
◆ 创新ClickTek技术全面提升用户分析体验
◆ 出类拔萃的超高灵敏度及重现性
◆ 多种先进功能带来生态友好
◆ 适应分析需求的工作站软件可有效提升实验室分析效率

色谱柱

SH-Rt™-2560气相色谱柱(100 m×0.25 mm×0.2 μm)

◆ 强极性固定相。二氰丙基-聚硅氧烷,非键合,故不能进行溶剂清洗
◆ 专用于分析顺式/反式脂肪酸甲酯(FAMEs)
◆ P/N:227-36311-01

应用实例

36种脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图

  按照药典气相色谱分析条件,以异辛烷为溶剂配制总浓度为10 mg/mL 脂肪酸甲酯混合(油酸甲酯、反式油酸甲酯 、亚油酸甲酯顺反异构体 、亚麻酸甲酯顺反异构体)标准溶液。

2020版药典 四部102页0713通则 反式脂肪酸混合标液标准图谱

  我们的色谱图结果很好重现了药典的标准图谱,系统适用性完全达到药典要求(“顺-9,12-反-15-十八碳三烯酸甲酯(C18 : 3c9cl2t15)和亚麻酸甲酯(C18 : 3c9cl2cl5)的分离度应不小于1.0)。

典型反式脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图

  36种脂肪酸甲酯、典型反式脂肪酸甲酯色谱峰分离度良好,表明SH-Rt™-2560气相色谱柱具备良好的分离性能,可以应对多种常见脂肪酸甲酯及反式脂肪酸甲酯的分离和测定。

重复性实验

  用异辛烷配制总浓度为10 mg/L的脂肪酸甲酯标准溶液,重复测试6次,计算相对标准偏差。6次重复测试的保留时间相对标准偏差小于0.2%,峰面积相对标准偏差小于5%,重复性良好。重复性实验结果如下表所示:

36种脂肪酸甲酯标准溶液(10 mg/L)重复性实验结果(n=6)

样品测定结果

  应用前述建立方法对两个药用大豆油样品进行了测定,色谱图如下所示,样品1和样品2色谱图相似,放大图进一步可以了解,样品1出现了反式油酸甲酯、亚油酸甲酯、亚麻酸甲酯多种混合物(9种),样品2进出现了3个反式脂肪酸化合物。

  在上期微信中,我们测定了两个药用大豆油样品“脂肪酸组成” ,检测结果表明两个样品脂肪酸甲酯组成种类一致,各组分含量接近。在本期案例中,依据对照品保留时间,结合样品中各脂肪酸甲酯的保留时间定性,使用峰面积归一化法定量,计算各反式脂肪酸甲酯含量(见下表),结果表明样品1反式脂肪酸含量(3.144%)明显高于样品2中数值(0.380%),意味着样品2质量优于样品1。

药用大豆油-1样品反式脂肪酸测试结果

药用大豆油-2样品反式脂肪酸测试结果

  结合前述案例,岛津建立了紫外可见分光光度法测定甲氧基苯胺值、气相色谱仪检测药用和药用辅料脂类物中脂肪酸组成、反式脂肪酸分析方法。

  上期“脂肪酸组成”和下期“反式脂肪酸”案例分析结果表明:仪器性能良好,所选色谱柱能较好的分离待测物,脂肪酸组成、反式脂肪酸系统适用性结果满足2020版药典0713通则要求。脂肪酸组成、反式脂肪酸混合对照品溶液连续6针重复测试,峰面积相对标准偏差均小于5%,重复性良好,相关企业可依据岛津建立方案来监控供药用或药用辅料的脂类物质及类似物产品质量。

  注:篇幅所限,仅列举检测实例部分内容,完整应用报告联系岛津获取。