摘要　GPC凝胶净化色谱和SPE固相萃取是目前在食品安全检测实验室常用的样品前处理方式。在线GPC可以实现GPC净化的在线完成，对乳制品中三聚氰胺的分析中能够进行较好的去除基质，使衍生化进行得更加彻底，检测限可以达到0.01mg/kg。
　　关键词　凝胶净化色谱；气质联用仪；三聚氰胺；前处理

1、实验部分
仪器条件和参数
岛津在线前处理联机系统GPC-GCMS
1.1 GPC条件：
流动相：丙酮+环己烷＝3+7，流量0.1mL/min。进样量20uL。
1.2 GCMS条件：
色谱柱：DB-5ms （30m×250um×0.25um）；
柱温：90℃，5min；15℃/min；190，0min；30℃/min；290，0min。
PTV进样口：120℃，5min；80℃/min；280，8min。5min后关闭分流阀。
质谱条件：scan模式，扫描范围m/z 86～400。SIM模式：m/z 342、327、328、171，定量离子m/z 342。
色质谱图见图2～6。

2、前处理方法
　　提取净化方法参照NY/T 1372-2007。
　　取样1～5g，按比例加入10倍量的二乙胺/水/乙腈=10/40/50(体积比)提取溶剂，混匀超声提取，取约1.5mL混合液，10000rmp离心5min，准确吸取1mL上清液过MCX（Waters，3cc，60mg）柱，依次用3mL水和3mL甲醇洗涤固相萃取柱，最后用3mL 5％氨化甲醇洗脱，洗脱液于70℃氮气吹干。按法衍生化，最后用氮气吹干衍生试剂，加入1mL流动相（GPC）后GPC-GCMS测定，进样20uL。
　　如图1，三聚氰胺TMS（3TMS）衍生物的GPC保留时间为3.29min（4min为溶剂峰），按仪器说明书编制GPC-GCMS的GPC部分和GCMS部分的条件。

3、结果与讨论
3.1 GPC在线前处理方法的优势
　　按NY/T 1372-2007（GC-MS法检出限0.05mg/kg），取5g样品，50mL提取液，最后取10mL（相当于1g样品）提取液过阳离子交换柱净化，很容易造成净化柱堵住，且取10mL过柱后由于杂质较多，衍生化的重现性很难做。本法只取1mL（相当于0.1g样品）提取液过阳离子交换柱，液体流过很通畅，最后净化效果与10mL样品过柱比要好得多。
　　本方法检出限为0.05mg/kg（相当于0.1g样品）。因为净化效果较好，衍生后的定容体积可以到0.2mL，检测限可以到0.01mg/kg（相当于0.1g样品）。
3.2 提取液的选择
　　同时测试了美国FDA用于测定宠物饲料的方法，用甲醇提取奶粉中的三聚氰胺，回收率很低（小于10％），且提取液中糖的含量较高，影响最后三聚氰胺的衍生化产率。用其它有机溶剂提取的方法都存在糖对衍生化的干扰，最后都要用阳离子交换的方法去除。

图1 标样和样品的GPC图

图2 40ng/mL三聚氰胺－3TMS（13.9min）标样SCAN模式下提取离子色谱图和质谱图


图3 100ng/mL三聚氰胺－3TMS标样（13.9min）SIM模式下提取离子色谱图和质谱图


图4 阴性样品提取离子色谱图（13.9min）


图5 上述样品加标2mg/kg的提取离子色谱图（回收率92％）


图6 某奶粉样品提取离子色谱图（20mg/kg）
 

4、小结
　　本文使用了在线前处理联机系统GPC-GCMS在奶制品中三聚氰胺的检测中，不但减少了样品分析的取样量，减少前处理时溶剂的使用量，使样品快速通过前处理柱，更好地去除干扰基质，使样品中目标化合物衍生化时更迅速、完全，检测的灵敏度更高，回收率结果满意，检测限可达到0.01mg/kg，满足各行业实验室对乳制品中三聚氰胺的分析检测要求。