检测方法 | 2020版《中国药典》2322通则应对-动物类中药形态汞测定

  《中国药典》2020年版中,通则《2322 汞、砷元素形态及其价态测定法》得到了升级。该通则中砷和汞的形态检验方法为专属性强、鉴别力好、成熟度高的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICPMS)。

  地龙(别名蚯蚓)是我国重要的中药材之一,地龙对土壤中的重金属元素具有较强的吸附和富集能力。汞是自然界中常见有毒致癌性元素之一,汞的生物毒性不仅与其含量有关,还与其存在形态有关。常见的汞化合物中,甲基汞等有机汞脂溶性高,容易被生物体所吸收,生物危害突出,毒性大小一般为甲基汞(MeHg)>乙基汞(EtHg)>无机汞(iHg)。为了准确表征地龙中汞的人体暴露水平,需要对汞的不同形态进行准确测定。

应对利器:



图1 HPLC-20Ai+ICPMS-2030联用系统

前处理:


色谱条件:


分析结果:


  取市售地龙药材,按照前处理方法处理后进HPLC-ICP-MS分析,并对样品进行1 μg/L加标回收试验。5 μg/L标准溶液的色谱图见图2,样品分析结果见表1,地龙中汞主要以无机汞形式存在,甲机汞和乙基汞未检出,3种形态汞的加标回收率为82.0~91.5%。


图2 无机汞、甲基汞和乙基汞谱图

表1 样品形态汞测试结果

注意事项:

◆ C18柱的填充物通常为硅胶材质,需控制流动相的pH值,太高的pH值会使硅胶溶解,C18柱使用的pH值通常为2~8,特殊材质的C18柱pH值可以为1-10。

◆ 用50%氨水调pH值时,因其碱性较强,需将氨水的浓度调低至5%左右,在pH值=7左右,少量滴加。

◆ ICP-MS的检测与化合物的结构无关,理论上等度洗脱程序、等浓度三种形态汞(以Hg计)的峰面积应该大致相同,若峰面积差异较大,需要排查标准溶液配制是否正确、测样过程中Hg形态是否发生变化、无机汞拖尾是否严重、柱效改变等。

◆ 由于流动相采用8%的甲醇,长期高有机负载会影响ICP-MS分析信号的稳定性,同时甲醇可能碳化导致锥孔堵塞,影响分析灵敏度。可以降低雾室温度为0℃,减少进入ICP中的甲醇蒸气。