检测方法 | 一文读懂阿胶定量“新标准”

  古语云“阿胶一碗,芝麻一盏,白米红馅蜜饯。粉腮似羞,杏花春雨带笑看。润了青春,保了天年,有了本钱”。阿胶能补血滋阴、润燥止血,自古为滋补上品。

  阿胶系驴皮经煎煮浓缩成的固体胶。近年来,随着驴皮货源紧缺,市面上存在不法商贩弄虚作假,以次充好,以牛皮、马皮等下脚料冒充驴皮制作假冒伪劣阿胶的行径,严重扰乱了阿胶市场。其他兽畜皮熬胶,也有补血止血的功能,但阿胶伪品的蛋白质成分及其含量和阿胶真品存在明显不同,与驴皮胶使用效果相差甚远。因此,掌握阿胶的真伪鉴别方法至关重要。

  为了进一步规范阿胶产业发展,提升阿胶品质保障能力,国家药典委在2019年发布关于“关于阿胶、海龙、海马等国家药品标准修订草案的公示”和“关于阿胶国家药品标准修订草案的公示(第二次)”两项公示稿,分别对阿胶【含量测定】和阿胶【鉴别】项下内容进行了修订。其中阿胶【含量测定】项修订幅度最大,新增了“特征多肽”含量要求:

◆ 驴源多肽A1特征离子对:m/z469.25>712.30和m/z z469.25>783.40,
◆ 驴源多肽A2特征离子对:m/z618.35> 779.40和m/z618.35> 850.40,
◆ 按干燥品计算,“含特征多肽以驴源多肽A1(C41H68N12O13)和驴源多肽A2(C51H82N18O18)的总量计应不得少于0.17%”。

 

  此外,在2012年药典委颁布了《阿胶中牛皮源质量的补充检验方法》。2015版《中国药典》中,明确规定使用液相色谱-串联质谱法用于阿胶、龟甲胶、鹿角胶的鉴别。最近,国家药监局还颁布了《阿胶中猪皮源的补充检验方法》,在阿胶产品中应不得检出猪皮源(新阿胶)成分。

  岛津参考以上标准和文献报道,使用胰蛋白酶对阿胶、牛皮胶和猪皮胶等不同来源的明胶类物质进行酶切处理,通过岛津LCMS-8045液相色谱质谱联用仪(图1)对特征多肽进行测定,从而实现阿胶与杂皮胶的鉴别与阿胶的定量。


图 1 岛津 LCMS-8045液相色谱质谱联用仪

主要方法参数

色谱柱:
Shim-pack GIST (2.1 mm I.D.×100 mm L., 2.0 μm)

MRM参数:见表1

表1 MRM优化参数

对照药材分析

  采用超高效液相色谱-质谱联用的方法,一次进样,同时分析8种特征多肽,实现阿胶药材的鉴别与定量。分析结果表明,阿胶、驴源多肽A1、驴源多肽A2、黄明胶、鹿角胶、龟甲胶、新阿胶、马皮源多肽信噪比均大于10:1,完全满足检测要求。如下图2



图2 阿胶等8种特征肽定性色谱图

样品测定

  对阿胶样品进行测定,黄明胶、鹿角胶、龟甲胶、新阿胶、马皮源通道均未检出;阿胶、驴源多肽A1、驴源多肽A2分离良好,峰形对称,且信噪比均大于10:1。如下图3(左右滑动查看全部内容)


图3   阿胶定性定量肽段测量

总结

  阿胶作为滋补佳品,消费者平时关注更多的是阿胶的功效。其实,无数“实验猿”为了保证阿胶的真实与有效,默默地完成了大量阿胶药材真伪鉴别与含量测定的工作。有了本文的方法,“实验猿”可以一针进样鉴别多种肽段,节省时间。除此之外,本方法加入了定量肽段,可以实现定性定量同时分析。

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参考文献

[1]  阿胶的【鉴别】(2015版药典第一部,189页)
[2]  龟甲胶的【鉴别】(2015版药典第一部,181页)
[3]  鹿角胶的【鉴别】(2015版药典第一部,322页)
[4]  阿胶中猪皮源成分检查项补充检验方法(BJY 201917)
[5]  阿胶中牛皮源质量的补充检测方法(中检院2012年标准)
[6]  阿胶【含量测定】公示稿
[7]  阿胶【鉴别】公示稿
[8]  杭宝建, 等. 超高效液相色谱-串联质谱法测定阿胶中马、牛、羊、猪、骆驼、鹿皮源成分[J]. 色谱, 2018(4):408-412.