检测方法 | 一文读懂阿胶定量“新标准”

　　古语云“阿胶一碗，芝麻一盏，白米红馅蜜饯。粉腮似羞，杏花春雨带笑看。润了青春，保了天年，有了本钱”。阿胶能补血滋阴、润燥止血，自古为滋补上品。

　　阿胶系驴皮经煎煮浓缩成的固体胶。近年来，随着驴皮货源紧缺，市面上存在不法商贩弄虚作假，以次充好，以牛皮、马皮等下脚料冒充驴皮制作假冒伪劣阿胶的行径，严重扰乱了阿胶市场。其他兽畜皮熬胶，也有补血止血的功能，但阿胶伪品的蛋白质成分及其含量和阿胶真品存在明显不同，与驴皮胶使用效果相差甚远。因此，掌握阿胶的真伪鉴别方法至关重要。

　　为了进一步规范阿胶产业发展，提升阿胶品质保障能力，国家药典委在2019年发布关于“关于阿胶、海龙、海马等国家药品标准修订草案的公示”和“关于阿胶国家药品标准修订草案的公示（第二次）”两项公示稿，分别对阿胶【含量测定】和阿胶【鉴别】项下内容进行了修订。其中阿胶【含量测定】项修订幅度很大，新增了“特征多肽”含量要求：

◆ 驴源多肽A1特征离子对：m/z469.25>712.30和m/z z469.25>783.40，
◆ 驴源多肽A2特征离子对：m/z618.35> 779.40和m/z618.35> 850.40，
◆ 按干燥品计算，“含特征多肽以驴源多肽A1（C41H68N12O13）和驴源多肽A2（C51H82N18O18）的总量计应不得少于0.17%”。

　　此外，在2012年药典委颁布了《阿胶中牛皮源质量的补充检验方法》。2015版《中国药典》中，明确规定使用液相色谱-串联质谱法用于阿胶、龟甲胶、鹿角胶的鉴别。最近，国家药监局还颁布了《阿胶中猪皮源的补充检验方法》，在阿胶产品中应不得检出猪皮源（新阿胶）成分。

　　岛津参考以上标准和文献报道，使用胰蛋白酶对阿胶、牛皮胶和猪皮胶等不同来源的明胶类物质进行酶切处理，通过岛津LCMS-8045液相色谱质谱联用仪(图1)对特征多肽进行测定，从而实现阿胶与杂皮胶的鉴别与阿胶的定量。

图 1 岛津 LCMS-8045液相色谱质谱联用仪

主要方法参数

色谱柱：
Shim-pack GIST (2.1 mm I.D.×100 mm L., 2.0 μm)

MRM参数：见表1

表1 MRM优化参数

对照药材分析

　　采用超高效液相色谱-质谱联用的方法，一次进样，同时分析8种特征多肽，实现阿胶药材的鉴别与定量。分析结果表明，阿胶、驴源多肽A1、驴源多肽A2、黄明胶、鹿角胶、龟甲胶、新阿胶、马皮源多肽信噪比均大于10：1，完全满足检测要求。如下图2

图2 阿胶等8种特征肽定性色谱图

样品测定

　　对阿胶样品进行测定，黄明胶、鹿角胶、龟甲胶、新阿胶、马皮源通道均未检出；阿胶、驴源多肽A1、驴源多肽A2分离良好，峰形对称，且信噪比均大于10：1。如下图3（左右滑动查看全部内容）

图3   阿胶定性定量肽段测量

总结

　　阿胶作为滋补佳品，消费者平时关注更多的是阿胶的功效。其实，无数“实验猿”为了保证阿胶的真实与有效，默默地完成了大量阿胶药材真伪鉴别与含量测定的工作。有了本文的方法，“实验猿”可以一针进样鉴别多种肽段，节省时间。除此之外，本方法加入了定量肽段，可以实现定性定量同时分析。

　　“暗服阿胶不肯道，却说生来为君容”。更多关于阿胶的文章，参阅岛津推出《胶类药材定性鉴别解决方案》，请点击【阅读全文】即可下载PDF版本。

参考文献

[1]  阿胶的【鉴别】（2015版药典第一部，189页）
[2]  龟甲胶的【鉴别】（2015版药典第一部，181页）
[3]  鹿角胶的【鉴别】（2015版药典第一部，322页）
[4]  阿胶中猪皮源成分检查项补充检验方法（BJY 201917）
[5]  阿胶中牛皮源质量的补充检测方法（中检院2012年标准）
[6]  阿胶【含量测定】公示稿
[7]  阿胶【鉴别】公示稿
[8]  杭宝建, 等. 超高效液相色谱-串联质谱法测定阿胶中马、牛、羊、猪、骆驼、鹿皮源成分[J]. 色谱, 2018(4):408-412.