本文建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪测定血清中脂溶性维生素A、25-羟基维生素D2、D3、维生素E和维生素K1的方法。采用磁性固相萃取对血清进行前处理，并通过内标法进行校正。可在12分钟完成32个测试处理，无需氮吹和离心处理。使用标准品、质控对方法线性、精密度、准确度进行考察。结果使用智能积分功能，无需设置参数，正确积分，避免积分到临近干扰峰。方法线性良好，相关系数r在0.993以上。质控精密度RSD在0.94%-13.6%之间，方法精密度良好。质控品测定准确度在86.2%~107.8%之间，方法准确度良好。该方法可用于血清中脂溶性维生素的准确定量检测，供相关从业人员参考。