解决方案-0512液相色谱法修订 色谱参数允许调整范围和方法转换
导语
2025版与2020版药典中“色谱参数调整”比较
2020版药典首次增订“色谱参数允许调整的范围”，2025年版药典进一步完善色谱参数调整范围。
| 序号 | 分类 | 增修订内容 |
|---|---|---|
| 1 | 色谱柱-从全多孔到表面多孔填料 | 1、全多孔到表面多孔填料调整范围增加了说明 2、分梯度与等度方式，要求与原方法相关参数的准确要求 3、对于目标物成分的选择性（保留性能）和出峰顺序要求不变 |
| 2 | 色谱柱-柱内径 | 1、增加内径调整参数 2、在填料粒径和/或柱长没有变化的情况下，可以调整柱内径 3、应注意柱子内径减小系统匹配度 |
| 3 | 流速 | 1、说明在没有调整柱尺寸和调整尺寸两种情况下允许的调整范围 2、调整尺寸后，等度和梯度按照提供公式，等度部分提到在计算值之后允许50%范围，梯度删除不允许扩大调整的要求 |
| 4 | 进样体积 | 1、增加：即便色谱柱尺寸没有调整，也可调整进样体积以满足系统适用性的要求 2、体积调整公式可能不适用于表面多孔(SPP)柱替代全多孔(TPP)柱 |
| 5 | 流动相比例 | 1、等度和梯度分别规定调整方向 2、等度调整绝对值最大范围 3、梯度增加比例和洗脱程序调整条件、分布调整策略 |
本次增订内容进一步优化了“使用不同粒径、内径色谱柱的液相色谱方法转换的操作准则”，用户可依据通则进行HPLC法向UHPLC法转换，可有效减少单针分析时间，提高分析通量，减少仪器用电耗能、人工成本、废液处理成本、试剂成本。
岛津方法转换应对方案
0512通则提到可通过相关软件计算表中流速、进样体积和梯度洗脱程序的调整范围，并根据色谱峰分离情况进行微调。面对检验和研发需求，岛津提供“方法转换计算器”、超高效液相色谱仪、色谱柱整体解决方案助力用户应对方法转换。
岛津方法转换工具
离线版
文件小，随时随地可用，岛津官网下载链接：
https://support.shimadzu.com.cn/an/cd-download/Release101MT.html
在线版
工作站集成版本使用移动仪器参数功能无需更换流路和混合器等部件就可以实现快速便捷的分析方法转换，自动生成方法转换后的分析条件参数，支持方法在线“下载”使用。
岛津方法转换工具特点
中文界面，操作简便
支持独立运行和集成进入LabSolutions工作站操作，该功能可兼容不同的岛津机型
方法转换工具可实现梯度开始时间或梯度程序的调节，工作站集成版本使用移动仪器参数功能无需更换流路和混合器等部件就可以实现快速便捷的分析方法转换，自动生成方法转换后的分析条件参数
计算器内置ChP（中国药典）和USP（美国药典）计算公式，自动计算流速、进样体积、梯度洗脱程序
内置混合器体积、进样体积、死体积及检测池体积选择项目，方便用户进行系统匹配
借助压力预测，可为仪器选型和色谱柱规格选择提供参考
使用方法
分别输入当前HPLC使用色谱柱和计划转换后UHPLC使用色谱柱规格（含柱长、内径、粒径信息）
左侧输入转换前HPLC色谱方法条件，软件自动计算转换后条件数值
左侧梯度表输入当前HPLC梯度程序，右侧即会自动转换为UHPLC梯度
使用注意事项
为获得良好方法转换效果及高匹配色谱图表现，须使用同一品牌同一系列（如SGLC的Shim-pack系列）或者性能相近的色谱柱，相同填充剂材质（硅胶或聚合物）、保护基团、键合相（C 18或其他）。
对于梯度分析， 系统延迟体积对于分析影响较大，需要注意HPLC和UHPLC使用仪器混合器体积差异，并在软件设置模块输入相应参数。
赤芍（芍药）配方颗粒方法转换实例
HPLC向UHPLC方法转换
使用Method Transfer方法转换计算器快速将HPLC条件转化为UHPLC条件，得到梯度程序如上图所示。
HPLC和UHPLC方法使用色谱柱
| 方法 |
色谱柱 |
L/dP |
变化值 |
|
HPLC |
Shim-pack GIST |
50000 |
0% |
|
UHPLC |
Shim-pack GIST |
50000 |
从HPLC转为UHPLC法，L/dP保持一致，符合“色谱参数调整范围”要求。
方法转换后系统适用性确认
方法转换前后对照药材参照物溶液色谱图
HPLC法转换为UHPLC法后，特征峰的出峰顺序和个数与原HPLC法保持一致，满足药典要求。特征峰与相邻色谱峰均达到基线分离，满足《中药配方颗粒国家标准申报资料目录及要求》规定。
UHPLC方法各溶液理论塔板数
| 名称 |
对照品参照物溶液 |
对照药材参照物溶液 |
供试品溶液 |
|
理论塔板数 |
50927 |
51449 |
51624 |
HPLC转换为UHPLC法后，各溶液中芍药苷的理论塔板数均远大于3000，符合标准规定。
对照药材参照物溶液精密度测试色谱图（n=6）
取对照药材参照物溶液连续进样6次，考察仪器精密度。8个特征峰的保留时间和峰面积RSD值分别在0.026%~0.235%和0.272%~0.982%，仪器精密度良好。
转换后UHPLC方法样品检测结果
供试品特征图谱分析结果评价
采用岛津Multi-Data Report功能对赤芍配方颗粒特征图谱分析结果进行快速评价，结果显示：HPLC法转换为UHPLC法后，特征峰3、6、7、8的相对保留时间及峰7、8的相对峰面积均符合标准规定，与HPLC法特征图谱分析结论一致。
综上所述，采用MT方法转换计算器进行赤芍配方颗粒HPLC法与UHPLC互相转换，该功能无需经过繁琐的计算即可一键进行方法的快速转换。HPLC法转为UHPLC法后，特征图谱分析时间由原来的60min缩短至16.95min，分析效率明显提高，且方法专属性、系统适用性及待测样品的分析结果均符合标准的规定。