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微粒体细胞色素P450介导的原人参皂苷代谢:代谢产物,反应的表型和结构代谢关系

尽管人参皂苷在胃肠道中的生物转化已被广泛的研究,但对肝细胞色素P450催化的代谢却知之甚少。本研究的主要目的是阐明细胞色素P450 亚型参与的代谢途径,揭示肝微粒体中的原人参三醇(PPT)型人参皂甙的结构-代谢关系。结果发现微粒体孵育系统中,人参皂苷Rh1、Rg2、Rf 和PPT 可以被有效地消除,而以C20 羟基糖取代为特征的Re 和Rg1 消除却微乎其微。使用高效液相离子阱飞行时间联用质谱仪分析发现,在C20 脂肪支链的氧化代谢为PPT 型人参皂甙在人类和大鼠肝微粒体内的主要代谢途径。通过与标准品比较,C24–25 双键被确定为一个产生C20–24 环氧化代谢物(拟人参皂苷元型人参皂甙)的氧化位点。化学抑制和重组人细胞色素P450 亚型分析表明,CYP3A4 是负责PPT 人参皂甙的氧化代谢的起主导作用的同工酶。在大鼠和人肝微粒体以及人重组CYP3A4 同工酶孵育系统的酶活评价结果基本一致,固有清除率排序为Rf≤Rg2 < Rh1 < PPT,与logP 值和糖基取代的数量密切相关。本研究的结果表明,CYP3A4 催化氧化代谢对人参皂甙的肝内分布和糖基取代具有重要作用,特别是在C20 的羟基,通过CYP3A4 决定其在体内的清除

基于代谢组学运用UFLC-IT-TOF/MS 和氢谱发现大鼠尿液中雄黄的安全生物标志物

作为含砷化合物,雄黄(As4S4)既是已知的毒药又是一种治疗试剂。然而,对于伴随着雄黄疗效和毒性的准确生物化学变化缺乏完整的理解。在代谢组学方法的基础上,结合超快速液相色谱(UFLC)串联离子阱飞行时间质谱(IT-TOF/MS)和氢谱,我们能够很明显地识别出雄黄给药的大鼠尿液样本中代谢物。对液相色谱/质谱和核磁共振技术平台的稳定性进行了系统地研究,对数据处理方法也进行了仔细地优化。我们的研究结果表明,在氨基酸代谢、柠檬酸循环、胆碱代谢和卟啉代谢中出现了明显的紊乱。提出了三十六种代谢产物,作为雄黄引起紊乱相关的潜在安全标志物,而甘氨酸和丝氨酸有望作为与雄黄诱导紊乱相关的代谢途径的中心触点。基于代谢组学的液质联用和核磁共振氢谱方法,提供了一个关于雄黄对大鼠生化作用的系统的、整体的观点,未来也可用于其它药物或外源性物质的研究。

以外周的抗炎作用解释人参皂甙在脑中的低浓度分布和抗抑郁疗效之间的不相关现象

在预防和治疗各种中枢神经系统(CNS)疾病中人参的有效性已被广泛证实。然而,人参皂苷作为人参的主要成分,已确定很难进入脑组织,这种药代-药效不相关的现象很难解释。抗炎途径正在成为治疗抑郁症和其他中枢神经系统疾病的有效策略;然而,以往的研究主要集中在直接作用于中枢神经系统的抗炎治疗。因而,令人感兴趣的是对于已确定在大脑中较少分布的人参皂苷,是否能够对脂多糖(LPS)诱导的抑郁和神经发炎进行治疗。

使用Trap-Free二维HPLC和LC/MS/MS测定药物中的杂质

通常,采用HPLC-UV法进行杂质测定,但该方法无法将HPLC中使用的不挥发性流动相直接应用到LC/MS分析中。因此测定时需要将其替换成挥发性流动相。该操作不仅步骤繁琐,而且会导致洗脱顺序变化和丢失主成分生成的杂质,因此测定时需要谨慎操作。本文向您介绍使用Trap-Free二维HPLC,对不挥发性流动相中检测到的杂质,在不进行预处理的条件下在线转换为挥发性流动相,并使用三重四极杆液质联用仪LCMS-8040进行分析的示例

使用LCMS-8040 测定血浆中的同型半胱氨酸

测定蛋氨酸代谢途径中的蛋氨酸合成酶活性和亚甲基四氢叶酸还原酶活性时,可将同型半胱氨酸作为指标。本文为您介绍Meyer Children's Hospital, Mass Spectrometry,Clinical Chemistry and Pharmacology Lab.(Florence, Italy)使用岛津三重四极杆液相色谱质谱联用仪LCMS-8040 对同型半胱氨酸进行测定的方法。

使用LCMS-8040 测定DBS(Dried Blood Spot)中富马酰乙酰乙酸水解酶活性

测定氨基酸代谢中的富马酰乙酰乙酸水解酶活性时,可使用代谢中间产物富马酰乙酰乙酸或琥珀酰丙酮(SuAC)作为指标。本文为您介绍Meyer Children's Hospital, Mass Spectrometry,Clinical Chemistry and Pharmacology Lab.(Florence, Italy)使用岛津三重四极杆液相色谱质谱联用仪LCMS-8040 对琥珀酰丙酮进行测定的方法。

使用LCMS-8040 测定尿液中腺苷脱氨酶的活性

腺苷脱氨酶(ADA)是影响细胞内核酸代谢重要的酶类。它将核酸碱基的腺苷(ADO)、脱氧腺苷(dADO)转变为肌苷、脱氧肌苷(图1)。本次分析通过对腺苷和脱氧腺苷进行测定,从而确认ADA酶活性。本文介绍Meyer Children's Hospital, Mass Spectrometry,Clinical Chemistry and Pharmacology Lab.(Florence, Italy)使用岛津三重四极杆液相色谱质谱联用仪LCMS-8040 进行测定的方法。

基于岛津"Co-Sense for Impurities"的药剂杂质LC/MS/MS分析

在医药品等的杂质管理当中经常应用HPLC-UV法。但是,HPLC-UV 法在高效分离条件下不能适应MS 检测,难以进行杂质的定性分析。此时,如果使用岛津的“Co-Sense for Impurities”系统,则可以将来自色谱柱的洗脱液置换为挥发性流动相后进行LC/MS 分析。本文介绍将LC/MS/MS 分析应用于基于日本药典的HPLC-UV 法雷贝拉唑钠检测的实例。

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