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应用蛋白质测序仪PPSQ-53A测定N-末端部分甲硫氨酸缺失的蛋白质类药物的N端氨基酸序列

生物体在合成蛋白质时,N端首位的甲硫氨酸在蛋白质加工过程中可能被酶切除。本文应用蛋白质测序仪PPSQ-53A测定了发生N-末端部分甲硫氨酸切除的蛋白质类药物重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子的N端前16个氨基酸的序列,结果与理论序列一致。除了氨基酸定性,根据信号峰强度,可以粗略估计样品N端甲硫氨酸的缺失比例。以上表明应用PPSQ-53A可以测定N-末端部分甲硫氨酸缺失的蛋白质的N端氨基酸序列。

应用蛋白质测序仪PPSQ-53A测定重组人粒细胞刺激因子的N端氨基酸序列

本文对基因工程药物重组人粒细胞刺激因子原液除盐后,应用蛋白质测序仪PPSQ-53A测定N端前16个氨基酸的序列,结果与理论序列一致,验证了此方法的准确性,展示了重组人粒细胞刺激因子的分析结果。

应用蛋白质测序仪PPSQ-53A测定重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白的N端氨基酸序列

本文通过SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)对融合蛋白质类药物重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白进行分离后,电转印至PVDF膜(聚偏氟乙烯膜)上,剪切目标条带,应用蛋白质测序仪PPSQ-53A测定N端前15个氨基酸的序列,结果与理论序列一致,验证了此方法的准确性,展示了重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白的分析结果。

MALDI-TOF快速鉴定病毒蛋白类疫苗亚基组成

本文应用岛津基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF)检测疫苗蛋白组分,检测各亚基的分子量信息、分布与比例。结果显示标准品具有完整亚基组成,疫苗样品也具有较好的亚基完整性。该结果与疫苗样品的活性结果匹配。本例表明此方法无需样品前处理、快速简便、可靠性强,可为疫苗亚基组成分析提供有力参考。

应用台式MALDI-TOF-MS鉴定蛋白质种类

本文应用岛津台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪MALDI-8020,在线性正离子模式下,以CHCA(α-氰基-4-羟基肉桂酸)为基质,分析花生过敏原蛋白质Ara h 2的酶解产物,得到了精确的分子量分布信息。将酶解产物的PMF(肽指纹图谱)检索Mascot数据库,成功匹配到理论蛋白质信息。

微芯片电泳MultiNA分析异源双链迁移率(Heteroduplex Mobility Assay)

随着利用转录激活样效应因子核酸酶(Transcription Activator-Like Effector Nuclease)和CRISPR/CAS9 (Clustered Regularly InterspacedShort Palindromic Repeats/CRISPR Associated Proteins 9)的基因组编辑工具的诞生,使得对靶基因进行特异性的破坏和引入基因成为可能。由于能适用于微生物、动物、植物等过去难以进行基因修饰的生物,因此其普及速度十分迅速。评估靶部位有无发生突变的方法包括直接分析序列的方法以及使用酶识别切割不匹配双链的方法,无论哪种方法均费时费力,成本相对较高。HMA(异源双链迁移率分析)是一种简便、迅速、以低成本实施的方法(图1)。在通常的电泳中,DNA是完全互补的同源双链体,其迁移率取决于分子量(大小)。另一方面,双链中其中一条链的一部分发生了突变的DNA,其不匹配的部分不形成互补链,而是成为异源双链DNA。异源双链DNA的不匹配部分与同源双链DNA具有不同的立体结构。因此,异源双链DNA在电泳中呈迁移率较低的趋势。HMA能利用上述现象测定有无发生突变,并通过电泳判断基因型。

应用台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析蛋白质类药物重组人粒细胞刺激因子的分子量及分布

本文应用岛津台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪MALDI-8020,在线性正离子模式下,以芥子酸(SA)为基质,分析蛋白质类药物重组人粒细胞刺激因子的分子量,不仅得到了精确的分子量信息,还观察到了不同电荷离子及蛋白质多聚体的存在和分布。本例可为蛋白质类药物分子量及分布分析提供参考。

基于SFC-IT-TOF技术的大鼠脑卒中非靶向脂质组学研究 (SFC-IT-TOF)

脑卒中是全球范围内发病率、致死率以及致残率最高的疾病之一。如何有效地对脑卒中进行早期诊断,是当前医学研究的热点和难点。而寻找脑卒中的生物标志物是疾病早期诊断和后续治疗的重要依据。缺血性脑卒中是脑卒中的主要发病类型。近年来研究表明,缺血性脑卒中的发病机制与脂质代谢有关。脂质组学是从系统水平上研究生物体内的脂质,揭示脂质代谢与细胞、器官乃至机体的生理、病理过程之间关系的一门学科。目前应用超临界流体技术的分析技术进行脂质组学研究的报道较少。本文基于SFC-IT-TOF的方法对大鼠脑卒中的脂质组学进行研究,以及从脂质代谢的角度揭示了异甜菊醇钠在治疗脑卒中的可能作用机制。通过对模型组和正常组进行多元统计分析,一共筛选出20个差异代谢物,其中溶血磷脂和多不饱和脂肪酸的水平显著升高,说明了脑卒中的病理机制可能与PLA2以及炎症反应有关。

应用蛋白质测序仪PPSQ-53A测定曲妥珠单抗的N-末端氨基酸序列

本文使用SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)将曲妥珠单抗的重链和轻链进行分离后,通过电转印方法将凝胶上的样品转移到PVDF膜(聚偏氟乙烯膜)上,应用蛋白质测序仪PPSQ-53A分别测定重链和轻链的N-末端氨基酸序列,结果与理论序列一致,验证了此方法的准确性。

应用蛋白质测序仪PPSQ-53A测定蛋白质药物注射用重组人促红素原液的N-末端氨基酸序列

蛋白质药物注射用重组人促红素原液(CHO细胞)含有高浓度盐分及蛋白质稳定剂,不能直接用于N-末端氨基酸序列分析。本文利用自制脱盐装置对样品进行脱盐处理后应用蛋白质测序仪PPSQ-53A测定N-末端前15个氨基酸的序列,结果与理论序列一致,验证了此方法的准确性,表明本方法可以实现对含高浓度盐分的蛋白质类药物的N-末端氨基酸序列分析。

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