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基于MultiNA对大豆、玉米中转基因成分的定性检测

利用植物基因组提取试剂盒提取大豆、玉米各三组样品的基因组,分别以大豆内源Lectin和玉米内源Zein基因作为内参,针对转基因作物中常用的外源启动子CaMV35S和外源终止子NOS基因设计特异性引物进行PCR扩增,MultiNA检测扩增后产物判断是否存在转基因成分。结果显示三组大豆样品未检出转基因成分,而两组玉米样品检测出NOS外源基因,显示市场上可能存在未经标识的转基因玉米。本实验表明应用MultiNA可以实现转基因作物的筛选定性检测。

应用MultiNA对食用调和油的定性检测

截至到目前我国尚没有一条法规对调和油市场进行规范,在此情况下,一些企业受利益驱使,不断挑战诚信底线,利用标准漏洞,以次充好,导致食用油市场乱象丛生,价格虚高,严重伤害了消费者权益。本文利用分子生物学手段,针对食用调和油中大豆油和菜籽油的成分分别设计引物,进行多重PCR同时特异性扩增此两种基因,应用MultiNA检测PCR产物,结果显示两种基因片段(大豆163 bp,菜籽126 bp)被同时检测出,与理论片段(大豆162 bp,菜籽121 bp)大小基本一致。实验结果表明本方法可以对调和油中多种成分进行同时定性检测。

基于MultiNA对食用玉米油的定性检测

目前食用油掺假掺杂现象屡见不鲜,这不仅影响着消费者的健康,更影响消费信心,严重侵害了消费者的利益。本文利用DNA的分子生物学手段,基于不同物种具有不同的DNA序列,针对待鉴定物种的特异性基因设计PCR引物,利用MultiNA检测PCR扩增产物的存在及链长,建立了基于MultiNA鉴定食用油品种的方法。将玉米油中提取的特异性基因PCR扩增,MultiNA检测其扩增后产物大小为196 bp,与玉米基因PCR目标产物的大小190 bp基本一致。实验结果表明本方法可以实现对食用油的定性检测。

DNA外显子的定性与定量分析

本文利用MultiNA微芯片电泳对12个经过不同引物相同PCR反应和限制性内切酶酶切后可能含某DNA外显子片段的样品进行定性与定量,发现第10-12个样品在104 bp,101 bp和102 bp处各有1个浓度较高的片段,推断应该为同一片段,并且是目标外显子,尺寸约为102 bp,浓度分别为1.73 ng/μL,2.16 ng/μL,和1.37 ng/μL。

RFLP片段的定性与定量分析

本文利用MultiNA微芯片电泳对RFLP片段进行了多次定性与定量分析,并计算了重现性。样品主要片段尺寸约为304 bp,浓度约为6.2 ng/μL,另外,就准确度而言尺寸方面,±3 bp;浓度方面,±30%。就重现性尺寸方面,0.65%;浓度方面,14.81%。实验证明MultiNA微芯片电泳完全可以对微量RFLP片段进行定性与定量分析,可广泛应用于基因突变研究。

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析寡糖

糖类物质极性高、难挥发、热不稳定,其中寡糖和多糖还具有相对分子质量分布发散的性质,其质谱表征比较困难。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)灵敏、快速,对杂质的包容性强、分析的质量范围大,能够对糖类尤其是非衍生化糖进行直接分析。本文应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱以DHB(2,5-二羟基苯甲酸)为基质,对未衍生化的寡糖进行了分析,直接给出了寡糖样品分子量的分布、重复单元结构和离子峰的结构信息。

LCMS-8045检测血浆中VA和VE长期稳定性考察

本文使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用,连续30天测定血浆中维生素A和维生素E,分别考察了日内精密度和日间精密度。实验数据表明,在没有使用阀切换情况下,30天内维生素A和维生素E的平均RR值稳定,相对偏差小于10%,能够为临床诊断提供参考。

超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法测定鸡肉中喹诺酮类抗生素残留

本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用测定鸡肉中12种喹诺酮类抗生素的方法。该方法在9 min内完成12种抗生素的分析,校准曲线的相关系数均在0.997以上。对不同浓度抗生素的混合标准溶液各平行测试6次,12种目标化合物的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.03~0.27%和1.13~4.93%之间,仪器精密度良好。对于不同浓度下基质加标回收率范围在91.90~108.60%之间。该方法可应用于鸡肉中12种喹诺酮类抗生素残留的同时检测。

超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法同时测定细胞培养上清液中95种化合物

本文使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8060联用,建立了一种同时测定细胞培养上清液中95种化合物的方法。该方法在17 min内可完成95种化合物的分析,适用于细胞培养上清液中糖类、氨基酸类、核苷酸类、维生素类等化合物的快速检测,且重复性好、灵敏度高。利用该方法,我们考察了细胞株在4种不同培养基中的营养物和代谢物变化情况,并绘制出目标物的时间变化趋势图,对相关研究人员判断细胞状态、改进培养基组成具有一定参考意义。

LCMS-8060测定人血浆中新型降糖药及其代谢物

本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱和三重四极杆质谱联用技术LCMS-8060测定人血浆中的新型降糖药CX1001及其代谢物 CX1001-M1的方法。人血浆样品经二氯甲烷萃取后,可在5.5min内快速、准确地完成分析。本文考察了方法的线性、精密度与准确度、回收率和残留,结果表明 CX1001及其代谢物 CX1001-M1线性范围分别为0.1~180 ng/mL,0.1~90 ng/mL,相关系数大于0.999,准确度范围90.6%~109%,线性良好;不同浓度质控样品每批次连续进样6次,其精密度与准确度分别在2.11~7.54 %与96.9~113%之间;血浆加标样品0.3 ng/mL平行分析五次,CX1001及其代谢物 CX1001-M1回收率分别为97.7%和97.0%。

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